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与大家分享一篇摘自JACS的文章“Site-Selective Lysine Acetylation of Human Immunoglobulin G for Immunoliposomes and Bispecific Antibody Complexes”。作者报道了一种由肽引导的、邻近驱动的IgG单个赖氨酸残基Lys 248的乙酰化反应，并达到乙酰转移酶的区域选择性。
抗体通过化学修饰衍生化将提高其治疗指标，扩大其适用性。单由于非选择性反应导致修饰抗体的异质性群体，会使质量控制和临床使用复杂化。对反应位点的精确控制是一项具有挑战性的工作。作者在前期工作中证明，赖氨酸反应可以通过接近诱导的反应性进行位点选择性控制。 首先作者从噬菌体文库中鉴定出Fc-III肽以高亲和力结合了IgG Fc的铰链区，共结晶结果显示Fc-III肽的His5、Leu6和Glu8与IgG Fc的Lys 248非常接近。作者用在侧链上含有苯基基序的谷氨酸衍生物取代了Fc-III的Glu8、Leu6或His5，并分别合成了多肽F1−F3。多肽F1能够在体外乙酰化IgG Fc蛋白，将叠氮乙酰基从肽F1转移到IgG Fc上得到Fc-N3，Fc-N3通过与荧光分子DBCO−PEG4−TAMRA反应进一步衍生得到Fc-TAMRA。该反应证明了肽结合驱动了IgG Fc的乙酰化反应。
接下来，作者将乙酰化反应应用于阿替唑珠单抗（Atezo），其通过阻断程序性死亡配体1（程序性PD-L1）与程序性细胞死亡蛋白1（PD-1）和CD80受体（B7-1Rs）的相互作用，用于治疗非小细胞肺癌。作者通过F1成功合成了TAMRA标记的Atezo（Atezo-TAMRA）。为确定乙酰化位点，作者通过MALDI-TOF和（LC−MS）/MS分析了Fc-TARMA、IgG-TAMRA和Atezo-TAMRA。发现与未修饰的Fc、IgG和Atezo相比，在Fc-III肽结合袋周围以Lys 248结束的两个肽段消失，证明了DBCO−PEG4−TAMRA在Lys 248处发生乙酰化和衍生化。
接下来，作者通过F1共价连接了Tras和Atezo的Fc结构域，构建了bsabc。反应后用阴性染色电镜（EM）直接观察Tras-Atezo bsAbCs。单粒子分析显示，同时存在单体和二聚体IgG，可能分别对应于Tras/Atezo单体和bsAbCs，比例为9：1。
最后，作者探索了bsabc介导的T细胞对靶癌细胞的杀伤作用。发现相比于阴性对照，当Tras-OKT3 bsAbC存在时，作者仅观察到HER2+ SK-OV-3细胞的显著裂解，且Tras-OKT3 bsAbC的有效浓度地低至5 nM。表明Tras-OKT3 bsAbC可以有效地招募T细胞到同源的癌细胞靶点，从而导致T细胞介导的细胞毒性。
本文作者：HSQ 责任编辑：WQX DOI:10.1021/jacs.2c07594 原文链接：https://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/jacs.2c07594
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